Abstract
The PCR-based technique of randomly amplified polymorphic DNA (RAPD) was used to fingerprint and assess the genetic relatedness among nine species of the fungus Alternaria isolated from various crop plants showing the leaf spot disease in Mosul, Iraq. Genomic DNA of each species was extracted at a final concentration of 300 - 400 µg / 2-3 g of wet mycelium , and at a purity of 1.6-1.8. Each DNA sample was amplified with each of 22 primers and the products were resolved electrophoretically on 1.2% agarose gel, stained with ethidium bromide and photographed under UV. One Primer failed to support amplification but the remaining 21 (95.5%) primers produced a total of 112 bands (2-10 per primer) across the nine species. Of these bands, 100 (1-10 per primer ) were polymorphic. The least efficient primer was OP-H01 (1.79%), while the most efficient one weas OP-M05 (8.93 %). Primers OP-C05, OP-E20 and OP-T20 had the lowest (0.1%) discriminatory power while primer OP-M05 had the highest (10 %) power and identified all 9 species through unique patterns of banding. RAPD analysis fingerprinted eight of the nine isolates through marker bands with one or more of the 21 primers. Cluster analysis based on the genetic distances split the nine species into three distinct clusters with no obvious association between the pattern of clustering of the species and their host specificities
Keywords
Alternaria
genetic variability
PCR
RAPD
Abstract
لقد جرى استخدام تقنية RAPD المعتمدة على تفاعل PCR لايجاد البصمة الوراثية والعلاقة الوراثية بين تسعة انواع من الفطر Alternaria المعزولة من نباتات محاصيل مختلفة مصابة بمرض تبقع الاوراق في مدينة الموصل / العراق. وجرى استخلاص الدنا من كل نوع وبتركيز نهائي قدره 400-300 مايكروغرام لكل 3-2غرامات من الغزل الفطري الرطب وبنقاوة 1.8-1.6. وجرت مضاعفة كل عينة من عينات الدنا بواسطة 22 بادئا وفرزت النتائج بالترحيل كهربائيا خلال هلام الاكاروز ذي التركيز 1.2% والمصبغ بالمادة المتألقة بروميد الايثيديوم والتصوير تحت اشعة الــUV. وفيما اخفق احد البوادئ في دعم عملية التضاعف لاي دنا مجيني فقد افلح 21 بادئا اخر في ذلك وانتجت ما مجموعه 112 حزمة دنا ( بمعدل 10-2لكل بادئ) عبر الانواع الفطرية التسعة وكان 100 حزمة من هذه الحزم متباينا ( بمعدل 10-1 لكل بادئ ) وكان اقل البوادئ كفاءة في اسناد التضاعف هو البادئ OP-H01 (بكفاءة 1.79%)، و أكثرها كفاءة (10%) وهو البادئ OP-M05، إذ استطاع ان يميز جميع الانواع التسعة وذلك من خلال الانماط الفريدة من التحزيم في كل نوع. لقد استطاعت تقنية RAPD كذلك تحديد البصمة الوراثية لثمانية انواع من الانواع التسعة المدروسة وذلك من خلال ظهور حزم مؤشرة فريدة حين مضاعفة الدنا من كل نوع من هذه الانواع مع واحد او اكثر من البوادئ الواحد والعشرين أعلاه. كما أن التحليل العنقودي للمسافات الوراثية بين هذه الانواع التسعة قد وضع الانواع في ثلاث مجموعات رئيسة دون ملاحظة وجود علاقة بين توزيع الانواع على هذه العناقيد الثلاثة وتوزيعها على المضائف التي جمعت منها.