Abstract
Phytase produced from an edible local mushroom P.ostreatus11L was purified in three steps, in precipitation with ammonium Sulfate (saturation ratio70%), the specific activity of phytase increased from 0.38u/mg protein in crude extract to 0.77 u/mg protein with purification of 2.03 fold and the enzyme yield was 92.05%, in ion exchange chromatography(DEAE-cellulose) step, specific activity was 3.6 u/mg protein with purification of 9.47 fold with a yield of 71. 82%. In the last step, with gel filtration chromatography using Sephadex G75 which gave the highest specific activity reached 7.5 U/mg with the purification folds arrived to 19.74 and enzyme yield was 42.61%. The results showed that there is only one band appeared in SDS-PAGE technique indicating a high purity of phytase enzyme , the purified phytase behaved as a monomeric protein with a molecular mass of about 25.12 kDa . The phytase was active over a broad range of incubation temperature (20 - 50ºC), maximal activity was 0.83 unit/ml when phytase incubated at 30ºC while the enzyme has thermal stability over a broad range of temperatures (20-60ºC) for one h since more than 50 % of the relative enzyme activity was retained after incubation. Phytase was active over a broad range of pH (4-8), maximal activity was 0.81unit/ml when phytase incubated at pH 6 followed by 0.79 unit/ml when phytase incubated at pH 5 without significant differences between them. In addition , the enzyme was full stable at pH 5 and 6 for 1 h of incubation at 37oC. phytase activity didn’t reach 70% at the other pH values. Hence it is inferred that the phytase was active over a broad range of pH 4-8. Among various metal ions, only MgSO4 has a syregenic effect with phytase activity in which activity increased as residual activity was 117.36% , while CuSO4 and ZnCl were the most inhibitory agents for P.ostreatus phytase.
Abstract
اجريت تنقية الفايتيز من الفطر P.ostreatus (11L) بثلاث خطوات شملت الترسيب بملح كبريتات الامونيوم (نسبة الاشباع 70%) وفيها ارتفعت الفعالية النوعية من 0.38 وحدة/ملغم بروتين في المستخلص الخام الى 0.77 وحدة/ ملغم بروتين بعدد مرات التنقية 2.03 مرة وبحصيلة انزيمية 92.05% ، وعند خطوة كروماتوغرافيا التبادل الايوني باستخدام DEAE-cellulose بلغت الفعالية النوعية 3.6 وحدة/ملغم بروتين بعدد مرات التنقية 9.47 مرة وبحصيلة انزيمية 71.82% وفي اخر خطوة باستخدام كروماتوغرافيا الترشيح الهلامي باستخدام الهلام Sephadex G 75 وصلت اعلى فعالية نوعية عند 7.5 وحدة/ ملغم بوتين بعدد مرات التنقية 19.74 مرة وبحصيلة انزيمية 42.61 %, اظهرت نتائج الترحيل الكهربائي باستخدام هلام الاكريلامايد المتعدد وجود حزمة بروتينية واحدة دليل على نقاوة الانزيم، بلغ الوزن الجزيئي للفايتيز المنقى 25.12 كيلودالتون، ابدى الفايتيز المنقى فعالية بمدى حراري 20-50م وبلغت اعلى فعالية انزيمية 0.83 وحدة/مل عند درجة حرارة 30م , بينما كان الانزيم ثابت عند مدى 20-60م لمدة ساعة واحدة اذ لم تنخفض الفعالية عن 50% ، كما كان الفايتيز المنقى فعالا عند مدى 4-8 من الرقم الهيدروجيني واعلى فعالية بلغت 0.81 وحدة/مل عند الرقم الهيدروجيني 6 تليها 0.79 وحدة/مل عند التحضين بالرقم الهيدروجيني5 مع عدم وجود فرق معنوي بينهما كما وكان الانزيم ثابت تماما عند قيم 5 و6 من الرقم الهيدروجيني عند التحضين مدة ساعة واحدة بدرجة حرارة 37م ولم تنخفض الفعالية عند اقل من 70% عند قيم الرقم الهيدروجيني الاخرى وعليه فيعد ثابت عندى المدى 4-8. بين مختلف المواد المعدنية سجلت كبريتات المغنيسيوم فقط تاثير تازري في زيادة فعالية الانزيم اذ بلغت الفعالية المتبقية 117.36% بينما ادت كل من كبريتات النحاس وكلوريد الخارصين الى اعلى تثبيط في فعالية الانزيم.